现代分子生物学技术及实验技巧电子书

出版者的话

前言

第一章 分子生物学技术概述

一、引言

二、目的基因的获取

三、克隆载体的构建和选择

四、载体的转化

五、重组子的筛选

六、基因表达

七、生物工程技术的应用

参考文献

第二章 核酸提取技术

第一节 质粒DNA的提取

一、引言

二、碱裂解法小量质粒提取所需的仪器、材料及基本步骤[3]

三、Promega质粒DNA小量提取试剂盒操作程序

四、注意事项

五、实验结果说明

六、疑难解析

第二节 基因组DNA的提取

一、引言

二、从植物组织提取基因组DNA[6～9]

三、从动物组织提取基因组DNA[10]

四、细菌基因组DNA的制备[11]

五、用DNA提取试剂盒从全血和组织中提取基因组DNA[12～14]

六、注意事项

七、实验结果说明

八、疑难解析[10]

第三节 RNA的提取

一、引言

二、实验设计思路和基本步骤

三、实验结果说明

四、疑难解析

参考文献

第三章 目的基因的获取及鉴定技术

第一节 普通PCR

一、普通PCR的基本概念和原理

二、普通PCR技术的实验方法

三、疑难解析

第二节 实时荧光定量PCR

一、实时荧光定量PCR的基本概念和原理

二、实时荧光定量PCR的定量方法

三、荧光定量PCR的实验方法

四、荧光定量PCR技术的应用

五、疑难解析[64]

第三节 环介导恒温扩增法快速检测病原菌

一、引言

二、环介导恒温核酸扩增的原理

三、实验设计思路和基本步骤

四、实验结果

五、疑难解析

六、小结

参考文献

第四章 载体的构建和鉴定

第一节 克隆载体

一、pBR322载体

二、pUC8——一种Lac选择型质粒

三、pGEM3Z——克隆DNA的体外转录

四、柯斯质粒载体[5]

第二节 表达载体

一、原核表达载体

二、真核表达载体

第三节 载体构建中的关键工具和步骤

一、关键工具

二、关键步骤

第四节 载体构建的应用举例

一、实验材料

二、实验方法

参考文献

第五章 细菌转化与细胞转染技术

第一节 细菌转化

一、基本原理

二、实验设计思路和基本步骤

三、实验结果及分析

四、疑难解析

第二节 细胞转染

一、基本原理

二、实验设计和基本步骤

三、实验结果及分析

四、疑难解析

参考文献

第六章 外源基因表达的鉴定

第一节 Northern Blot

一、引言

二、实验设计思路和基本步骤

三、实验结果说明

四、疑难解析

第二节 RT-PCR

一、引言

二、实验设计思路和基本步骤

三、实验结果说明

四、疑难解析

第三节 Western Blot

一、引言

二、实验设计思路和基本步骤

三、实验结果说明

四、疑难解析

第四节 ELISA

一、引言

二、实验设计思路和基本步骤

三、实验结果说明

四、疑难解析

参考文献

第七章 报告基因分析

第一节 报告基因的定义和种类

一、报告基因的定义

二、常用的报告基因

第二节 应用报告基因分析基因的转录活性

一、实验原理

二、实验设计和基本步骤

三、实验结果分析

四、疑难解析

第三节 报告基因在动物活体成像中的应用

一、实验原理

二、实验设计和基本步骤

三、实验结果分析

四、疑难解析

参考文献

第八章 差异基因表达谱分析

第一节 基于双向电泳技术的蛋白质组学分析

一、引言

二、实验基本步骤和注意事项

三、双向电泳实验结果说明及疑难解析

四、质谱数据分析说明及疑难解析

五、结语

第二节 基因芯片

一、引言

二、工作原理

第三节 基因芯片的制备

一、概述

二、探针的选择和制备

三、基因芯片基片的选择和准备

四、基因芯片的制作

第四节 基因芯片的检测

一、基因芯片的杂交和数据获取

二、基因芯片分析常用的软件和数据库

第五节 基因芯片的应用

一、基因芯片与病原微生物检测

二、基因芯片与肿瘤

三、基因芯片与药物研发

四、结束语

参考文献

第九章 蛋白质-核酸相互作用技术

第一节 凝胶迁移实验

一、引言

二、实验设计与基本步骤

三、实验举例与结果说明

四、需要注意的问题

第二节 染色质免疫共沉淀技术

一、引言

二、实验基本步骤

三、实验举例

四、实验注意事项

第三节 RNA 沉降

一、实验基本原理

二、实验基本思路

三、实验举例说明

参考文献

第十章 蛋白质-蛋白质相互作用技术

第一节 运用酵母双杂交技术筛选与

靶蛋白相互作用的蛋白质

一、引言

二、实验设备及材料

三、实验设计流程

四、实验方法

五、实验结果说明

六、疑难解析

第二节 GST沉降

一、实验基本原理

二、实验基本步骤

三、实验举例

四、实验注意事项

第三节 免疫共沉淀

一、引言

二、实验设计和基本步骤

三、实验结果举例

四、需要注意的问题

第四节 细胞共定位

一、引言

二、实验设计和基本步骤

三、实验结果举例说明

四、实验注意事项

参考文献

第十一章 微生物体内同源重组技术

第一节 传统的大肠杆菌体内同源重组方法（RecA重组系统）

一、引言

二、利用RecA重组系统构建痢疾杆菌hns基因插入突变体

三、RecA重组系统构建突变体的其他方法

四、存在的问题和解决方法

五、小结

第二节 Red/ET重组系统

一、引言

二、痢疾杆菌酸hns基因缺失突变体的构建[17]

三、Red同源重组技术应用策略

四、应用Gap-Repair克隆技术构建pBR322-Red载体[21]

五、Red/ET重组系统的其他应用

六、小结

参考文献

第十二章 转基因动物技术

第一节 转基因动物概述

一、转基因动物的概念

二、转基因动物的分类

三、转基因动物的命名

四、转基因动物的基本原理

五、转基因动物的安全性和伦理学问题

六、转基因动物技术的发展概况

第二节 显微注射法制备转基因动物

一、仪器设备及材料

二、实验动物准备

三、转基因动物制备方法

四、影响转基因动物效率的因素

第三节 利用ES细胞制备转基因动物

一、ES细胞的研究历史

二、ES细胞的生物学特性

三、ES细胞分离培养的基本方法

四、ES细胞的遗传修饰

五、转基因制备

参考文献

第十三章 基因打靶技术

一、基因打靶技术的原理

二、利用同源重组构建基因打靶动物模型的基本步骤

三、基因打靶的策略

四、基因打靶的生物学意义和应用前景

参考文献

第十四章 流式细胞术实验方法

一、引言

二、实验方法

三、实验结果分析

四、流式细胞分析的质量控制

参考文献

第十五章 干细胞的分离培养与诱导分化

第一节 人胎盘来源间充质干细胞的分离培养与纯化

一、引言

二、材料、试剂与主要仪器设备

三、实验方法

四、实验结果

五、注意事项

第二节 小鼠间充质干细胞的分离培养与纯化

一、引言

二、骨髓法

三、密质骨法

第三节 人胚胎干细胞的培养

一、引言

二、实验材料

三、实验方法

四、注意事项

第四节 CD34+造血干细胞与CD14+单核细胞

向树突状细胞的诱导分化

一、引言

二、实验材料与方法

三、实验结果

四、注意事项

参考文献

第十六章 小RNA的构造及实验技术

第一节 miRNA克隆

一、材料与设备

二、实验方法

三、疑难解析

第二节 miRNA Northern Blot

一、材料与设备

二、实验方法[7，8]

三、疑难解析

第三节 miRNA原位杂交

一、材料与设备

二、实验方法

三、疑难解析

第四节 基于poly（A）加尾的miRNA RT-PCR

一、材料与设备

二、实验方法[15，16]

三、疑难解析

第五节 miRNA功能研究

一、miRNA表达检测

二、miRNA功能筛选鉴定

三、miRNA靶基因鉴定

第六节 siRNA的构造及实验研究

一、引言

二、如何进行siRNA实验

三、常用siRNA实验的基本步骤

四、实验结果说明

五、疑难解析

参考文献

第十七章 非编码RNA数据库及在线分析工具介绍

一、综合性非编码RNA数据库

二、miRNA相关数据库及预测

三、rRNA相关数据库及预测

四、sRNA相关数据库及预测

五、siRNA相关数据库及预测

六、tRNA相关数据库及预测

七、snoRNA相关数据库及预测

参考文献