大鼠心肌细胞Hsp110抗热应激损伤的分子病理学研究电子书

前言

第一章 热应激与热应激损伤

一、应激概述

（一）应激的概念

（二）应激的分类

（三）应激的调节

二、应激损伤

三、热应激对机体的影响

（一）热应激对生殖系统的影响

（二）热应激对血压的影响

（三）热应激对动物生产性能的影响

（四）热应激对矿物质代谢的影响

（五）热应激对肉品品质的影响

（六）热应激对动物血清生化指标的影响

（七）热应激对免疫功能的影响

四、热应激与热休克蛋白

（一）Hsp的概念

（二）Hsp的分类

（三）Hsp与热应激损伤

第二章 热休克蛋白Hsp110研究进展

一、Hsp110的分子特性

二、Hsp110的表达调控

三、Hsp110与其他Hsp的关系

四、Hsp110的影响因素与调控机制

五、Hsp110的生物学功能

（一）分子伴侣功能

（二）在缺血中的保护作用

（三）在胚胎发育中的作用

（四）在免疫中的作用

（五）在代谢中的作用

（六）在肿瘤中的表达

（七）在神经系统中的表达

六、结语

第三章 离体培养大鼠原代心肌细胞模型的建立与培养条件的优化

一、材料与方法

（一）材料

1. 实验动物

2. 器材与设备

3. 主要试剂

（二）方法

1. 细胞培养

2. 形态观察

3. 心肌细胞纯度鉴定

4. 不同BRDU浓度对心肌细胞与成纤维细胞的影响

5. 不同差速贴壁时间对心肌细胞的影响

6. 不同铺板细胞数对细胞贴壁率的影响

7. 心肌细胞铺板数与吸光值之间的关系

8. 统计分析

二、结果与分析

（一）心肌细胞形态

（二）心肌细胞免疫荧光及纯度鉴定

1. 心肌细胞免疫荧光鉴定

2. 心肌细胞纯度鉴定

（三）不同BRDU浓度对成纤维细胞及心肌细胞的影响

1. 不同浓度BRDU对成纤维细胞的影响

2. 不同浓度BRDU对心肌细胞的影响

（四）不同差速贴壁时间对心肌细胞的影响

1. 不同差速贴壁时间对成纤维细胞的影响

2. 不同差速贴壁时间对心肌细胞的影响

（五）不同铺板细胞数对细胞贴壁率的影响

（六）心肌细胞与吸光值的关系

三、讨论

四、结论

第四章 离体培养心肌细胞热应激性损伤与热休克蛋白Hsp110表达规律研究

一、材料与方法

（一）材料

1. 实验动物

2. 器材与设备

3. 主要试剂

4. 主要耗材

（二）方法

1. 细胞培养

2. 试验分组与热应激处理

3. 心肌细胞培养液酶活性检测

4. 热应激心肌细胞病理损伤检测

5. 免疫荧光检测

6. hsp110 mRNA实时PCR检测

7. Western blot检测

8. 统计分析

二、结果与分析

（一）热应激心肌细胞培养液中特异性酶的含量变化

1. 热应激心肌细胞培养液中LDH的含量变化

2. 热应激心肌细胞培养液中CK的含量变化

3. 热应激心肌细胞培养液中AST的量的变化

（二）热应激心肌细胞的应激性病理损伤

（三）热应激心肌细胞内Hsp110的定位

（四）热应激心肌细胞内hsp110 mRNA转录水平的变化

（五）热应激心肌细胞内Hsp110表达水平的变化

三、讨论

四、结论

第五章 离体培养热应激心肌细胞内Hsp110与HSF-1定位、表达及其相应mRNA转录

一、材料与方法

（一）材料

1. 实验动物

2. 器材与设备

3. 主要试剂

（二）方法

1. 细胞培养

2. 试验分组与热应激处理

3. 免疫荧光检测

4. hsp110 mRNA实时PCR检测

5. Western blot 检测

6. 统计分析

二、结果与分析

（一）热应激心肌细胞内HSF-1的定位

1. 对照组心肌细胞内HSF-1的定位

2. 60min热应激组心肌细胞内HSF-1的定位

3. 240min热应激组心肌细胞内HSF-1的定位

（二）热应激心肌细胞内hsp110 mRNA与hsf-1 mRNA 的转录

1. 热应激心肌细胞内hsp110 mRNA的转录

2. 热应激心肌细胞内hsf-1 mRNA的转录

（三）热应激心肌细胞内Hsp110与HSF-1的表达

1. 热应激心肌细胞内Hsp110的表达

2. 热应激心肌细胞内HSF-1的表达

三、讨论

四、结论

第六章 NAC对热应激心肌细胞Hsp110表达及相关分子信号通路影响的研究

一、材料与方法

（一）材料

1. 实验动物

2. 器材与设备

3. 主要试剂

（二）方法

1. 细胞培养

2. 500m mol/L NAC浓缩液配制

3. NAC处理对热应激心肌细胞内Hsp110表达及相关通路蛋白分子表达的影响

4. 热应激对NAC处理心肌细胞内Hsp110表达及相关通路蛋白分子表达的影响

5. 统计分析

二、结果与分析

（一）NAC处理对热应激心肌细胞内Hsp110表达及 相关通路蛋白分子表达的影响

1. NAC处理对热应激心肌细胞内Hsp110表达的影响

2. NAC处理对热应激心肌细胞内NF-κB表达的影响

3. NAC处理对热应激心肌细胞内细胞色素C（Cytochrome C）表达的影响

4. NAC处理对热应激心肌细胞内磷酸化NF-κB表达的影响

5. NAC处理对热应激心肌细胞内Cleaved caspase-3表达的影响

（二）热应激对NAC处理心肌细胞内Hsp110表达及 相关通路蛋白分子表达的影响

1. 热应激（42℃）对NAC处理心肌细胞内Hsp110表达的影响

2. 热应激（42℃）对NAC处理心肌细胞内NF-κB表达的影响

3. 热应激（42℃）对NAC处理心肌细胞内cytochrome C表达的影响

4. 热应激（42℃）对NAC处理心肌细胞内磷酸化NF-κB表达的影响

5. 热应激（42℃）对NAC处理心肌细胞内Cleaved caspase-3表达的影响

三、讨论

（一）NAC处理心肌细胞内Hsp110表达与线粒体凋 亡通路及核转录因子通路的相互关系

（二）热应激对NAC处理心肌细胞内Hsp110表达的 影响以及与线粒体凋亡通路、核转录因子通路的 相互关系

四、结论

第七章 NAC抵抗热应激损伤心肌细胞的病理学观察

一、材料与方法

（一）材料

1. 实验动物

2. 器材与设备

3. 主要试剂

（二）方法

1. 细胞培养

2. 500 mmol/L NAC浓缩液配制

3. NAC对热应激心肌细胞保护作用的病理学观察

4. 苏木精-伊红染色实验（HE）

5. 用数码显微系统对爬片细胞进行观察，拍照

二、结果与分析

（一）NAC处理对1h热应激心肌细胞保护的研究

（二）NAC处理对2h热应激心肌细胞保护的研究

（三） NAC处理对4h热应激心肌细胞保护的研究

（四）NAC处理对6h热应激心肌细胞保护的研究

三、讨论

四、结论

第八章 小RNA干扰技术对Hsp110基因表达沉默效率优化研究

一、材料与方法

（一）材料

1. 实验动物

2. 器材与设备

3. 主要试剂

（二）方法

1. hsp110 siRNA引物设计

2. hsp110 stealth siRNA引物的稀释

3. 不同物质的量浓度hsp110 siRNA引物对心肌细胞Hsp110基因的沉默效率

4. 相同物质的量浓度hsp110 siRNA引物在24～84h对心肌细胞Hsp110基因的沉默效率

5. 转染试剂混合物持续作用于心肌细胞，hsp110 siRNA对Hsp110基因表达的沉默

6. 统计分析

二、结果与分析

（一） hsp110 siRNA引物

1. Hsp110基因序列

2. hsp110 siRNA引物设计结果

3. hsp110 siRNA引物特异性验证结果

4. hsp110 siRNA阴性引物设计及特异性验证结果

（二）不同物质的量浓度hsp110 siRNA引物对心肌 细胞内Hsp110表达的沉默结果

（三）转染24h并添加血清后，hsp110 siRNA对心肌 细胞内Hsp110基因表达的沉默

（四）转染混合物持续作用心肌细胞，hsp110 siRNA 对Hsp110基因表达的沉默

（五）转染混合物对心肌细胞内Hsp110相对表达量及 其沉默效率的影响

三、讨论

四、结论

第九章 保护性蛋白Hsp110在热应激心肌细胞中的表达变化

一、材料与方法

（一）材料

1. 实验动物

2. 器材与设备

3. 主要试剂

（二）方法

1. 心肌细胞培养及分组

2. hsp110 siRNA引物对心肌细胞内Hsp110基因沉默

3. 热应激处理

4. 心肌特异性酶的测定

5. 总蛋白提取

6. 总蛋白浓度检测

7. Western blot试验

8. 流式细胞试验

9. 统计分析

二、结果与分析

（一）4h热应激心肌细胞酶的变化

（二）Western blot检测4h热应激心肌细胞内Hsp110的 表达量

（三）热应激心肌细胞流式细胞试验结果

三、讨论

四、结论

第十章 热应激hsp110siRNA沉默心肌细胞的病理学观察

一、材料与方法

（一）材料

1. 实验动物

2. 器材与设备

3. 主要试剂

（二）方法

1. 心肌细胞培养及分组

2. hsp110 stealth siRNA引物对心肌细胞内Hsp110基因沉默

3. 热应激处理

4. 细胞固定

5. 苏木精-伊红染色实验（HE）

6. 用数码显微系统对热应激心肌细胞进行观察、拍照

二、结果与分析

（一）1h热应激损伤hsp110 siRNA沉默心肌细胞的研究

（二）2h热应激损伤hsp110 siRNA沉默心肌细胞的研究

（三）4h热应激损伤hsp110 siRNA沉默心肌细胞的研究

（四）6h热应激损伤hsp110 siRNA沉默心肌细胞的研究

三、讨论

四、结论

参考文献