芽孢杆菌抗菌脂肽及其生物合成调控电子书

前言

第1章 绪论

1.1 芽孢杆菌抗菌脂肽研究进展

1.1.1 脂肽的种类、结构与合成

1.1.2 抗菌肽合成的代谢调节

1.1.3 脂肽的功能及应用

1.2 基因组改组研究进展

1.2.1 基因组改组的原理

1.2.2 基因组改组的技术路线

1.2.3 基因组改组的应用

1.2.4 基因改组技术展望

1.3 蛋白质组学研究技术

1.3.1 蛋白质组学的分类

1.3.2 蛋白质组学的应用

1.3.3 蛋白质组学的研究策略

1.3.4 蛋白质组学技术面临的问题

1.4 本研究的主要工作

1.4.1 研究目的和意义

1.4.2 研究的主要内容

第2章 淀粉液化芽孢杆菌理化诱变选育surfactin高产菌株

2.1 材料

2.1.1 仪器设备

2.1.2 菌种

2.1.3 培养基与溶液

2.2 理化诱变与筛选方法

2.2.1 诱变方法

2.2.2 筛选方法

2.2.3 高效液相色谱(HPLC)测定脂肽含量

2.2.4 抗菌脂肽产量计算方法

2.3 选育结果与分析

2.3.1 紫外诱变

2.3.2 NTG诱变

2.3.3 离子束诱变

2.4 讨论

2.5 本章小结

第3章 基因组改组选育淀粉液化芽孢杆菌surfactin高产菌株

3.1 材料

3.1.1 仪器设备

3.1.2 菌种

3.1.3 培养基与溶液

3.2 基因组改组实验方法

3.2.1 菌种保存

3.2.2 菌种初级诱变

3.2.3 原生质体的制备、灭活、再生与融合

3.2.4 基因组改组

3.2.5 surfactin产量测定

3.3 结果与分析

3.3.1 初始菌株的筛选

3.3.2 原生质体的制备条件研究

3.3.3 原生质体灭活条件研究

3.3.4 融合条件研究

3.3.5 融合子的挑选

3.3.6 基因组改组

3.3.7 菌株摇瓶发酵比较

3.3.8 FMB38的遗传稳定性

3.3.9 原始菌株(ES⁃2⁃4)与改组菌株(FMB38)在发酵罐中发酵性能比较

3.4 讨论

3.5 本章小结

第4章 实时荧光定量PCR检测突变菌株FMB38脂肽合成酶基因表达

4.1 材料

4.1.1 试剂

4.1.2 菌种

4.1.3 仪器设备

4.2 突变检测方法

4.2.1 引物设计

4.2.2 RNA提取前的实验准备

4.2.3 RNA提取

4.2.4 RNA质量检测鉴定

4.2.5 反转录PCR

4.2.6 荧光定量PCR

4.2.7 样本表达量的标准化

4.3 结果与分析

4.3.1 RNA提取

4.3.2 目的基因与内参基因qRT⁃PCR扩增

4.3.3 样本中靶基因的相对定量

4.4 讨论

4.5 本章小结

第5章 抗菌脂肽高产突变菌株FMB38差异蛋白质组学研究

5.1 材料

5.1.1 试剂及溶液

5.1.2 菌种

5.1.3 仪器设备

5.2 差异蛋白质组学研究

5.2.1 样品收集

5.2.2 全蛋白提取和定量

5.2.3 双向电泳

5.2.4 凝胶染色

5.2.5 图像采集及图谱分析

5.2.6 胶内酶解、质谱鉴定

5.2.7 数据库查询

5.2.8 生物信息学分析

5.3 结果与分析

5.3.1 双向电泳体系的建立

5.3.2 差异表达蛋白质的鉴定

5.3.3 蛋白质等电点和分子量分析

5.3.4 蛋白质的细胞定位分析

5.3.5 实验鉴定差异蛋白质分类与功能分析

5.3.6 几个差异蛋白点的肽质量指纹图谱分析

5.4 讨论

5.4.1 质谱分析

5.4.2 蛋白质翻译后修饰

5.4.3 与surfactin合成有关的蛋白

5.4.4 与代谢有关的蛋白质

5.4.5 能量产生与转化相关蛋白

5.4.6 DNA复制、重组和修复相关蛋白

5.4.7 翻译及翻译后修饰相关蛋白

5.4.8 与信号传导机制等有关的蛋白

5.4.9 假想蛋白与未知蛋白

5.5 本章小结

第6章 抗菌脂肽fengycin生物合成调控机理研究

6.1 材料

6.1.1 菌种

6.1.2 培养基与试剂

6.1.3 仪器设备

6.2 fengycin生物合成调控研究

6.2.1 筛选方法

6.2.2 高效液相色谱检测脂肽含量

6.2.3 抗菌脂肽产量计算方法

6.2.4 原始菌株的初级诱变

6.2.5 基因组改组

6.2.6 遗传稳定性试验

6.2.7 荧光定量PCR检测fengycin合成酶基因

6.2.8 蛋白质组学

6.3 结果与分析

6.3.1 初始菌株的筛选

6.3.2 基因组改组

6.3.3 FMB72遗传稳定性

6.3.4 fengycin产生菌生物学特性及发酵条件研究

6.3.5 靶基因fenA的相对定量

6.3.6 差异蛋白质组学相关研究

6.3.7 fengycin合成调控因子相关研究

6.4 讨论

6.5 本章小结

第7章 总结与展望

7.1 surfactin研究

7.2 fengycin研究

7.3 未来研究展望

参考文献