鼠伤寒沙门菌胞外核酸酶的活性与功能电子书

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内容简介

前言

第1章　绪论

1.1　鼠伤寒沙门菌的理化特性

1.1.1　沙门菌病原学

1.1.2　沙门菌的流行病学

1.1.3　沙门菌的诊断和鉴定

1.1.4　沙门菌病的防治

1.1.5　鼠伤寒沙门菌的致病机制

1.1.6　鼠伤寒沙门菌的危害

1.2　核酸酶

1.2.1　核酸酶的分类

1.2.2　核酸酶的功能

1.2.3　核酸酶在微生物感染中的作用

1.3　微生物5′-nucleotidase

1.4　目的与意义

第2章　鼠伤寒沙门菌胞外分泌蛋白核酸酶活性的鉴定

2.1　材料

2.1.1　菌株

2.1.2　主要试剂和培养基

2.1.3　主要试剂和培养基的配制

2.1.4　主要仪器设备

2.2　方法

2.2.1　鼠伤寒沙门菌SL1344株胞外蛋白的收集

2.2.2　琼脂糖凝胶电泳法测定胞外蛋白的核酸酶活性

2.2.3　琼脂扩散法测定胞外蛋白的核酸酶活性

2.2.4　琼脂培养法测定胞外蛋白核酸酶活性

2.2.5　温度对胞外蛋白核酸酶活性的影响

2.2.6　pH对胞外蛋白核酸酶活性的影响

2.2.7　金属阳离子对胞外蛋白核酸酶活性的影响

2.2.8　胞外蛋白活性核酸酶的SDS-PAGE酶谱和LC-ESI/MS/MS分析

2.3　结果

2.3.1　琼脂糖凝胶电泳法测定胞外蛋白的核酸酶活性

2.3.2　琼脂扩散法测定胞外蛋白的核酸酶活性

2.3.3　琼脂培养法测定胞外蛋白的核酸酶活性

2.3.4　温度对胞外蛋白核酸酶活性的影响

2.3.5　pH对胞外蛋白核酸酶活性的影响

2.3.6　金属离子对胞外蛋白核酸酶活性的影响

2.3.7　胞外蛋白活性核酸酶的SDS-PAGE酶谱和LC-ESI/MS/MS分析

2.4　讨论

2.5　小结

第3章　鼠伤寒沙门菌5′-nucleotidase基因的原核表达及活性分析

3.1　材料

3.1.1　菌株和质粒

3.1.2　主要试剂和培养基

3.1.3　主要试剂和培养基的配制

3.1.4　主要仪器设备

3.2　方法

3.2.1　引物合成

3.2.2　PCR产物或酶切产物的回收与纯化

3.2.3　大肠杆菌感受态的制备

3.2.4　质粒的提取与鉴定

3.2.5　5′-nucleotidase目的基因的扩增

3.2.6　pMD18-T-5′-nucleotidase克隆载体的连接与转化

3.2.7　pMD18-T-5′-nucleotidase克隆载体的鉴定

3.2.8　生物信息学分析

3.2.9　重组表达载体pET-32a-5′-nucleotidase的构建及鉴定

3.2.10　重组5′-nucleotidase蛋白的诱导表达

3.2.11　重组5′-nucleotidase蛋白的纯化

3.2.12　SDS-PAGE鉴定

3.2.13　Western-Blot分析

3.2.14　不同温度对重组5′-nucleotidase表达的影响

3.2.15　IPTG浓度对重组5′-nucleotidase诱导表达的影响

3.2.16　诱导时间对重组5′-nucleotidase诱导表达的影响

3.2.17　重组5′-nucleotidase的核酸酶活性检测

3.2.18　不同浓度对重组5′-nucleotidase的核酸酶活性的影响

3.2.19　不同温度对重组5′-nucleotidase的核酸酶活性的影响

3.2.20　重组5′-nucleotidase的热稳定性检测

3.2.21　pH对重组5′-nucleotidase的核酸酶活性的影响

3.2.22　金属阳离子对重组5′-nucleotidase核酸酶活性的影响

3.3　结果

3.3.1　pMD18-T-5′-nucleotidase的鉴定

3.3.2　同源性分析

3.3.3　理化性质分析

3.3.4　结构分析

3.3.5　重组表达载体pET-32a-5′-nucleotidase鉴定

3.3.6　SDS-PAGE鉴定及Western-blot分析

3.3.7　不同温度对重组5′-nucleotidase表达的影响

3.3.8　不同IPTG浓度对重组5′-nucleotidase表达的影响

3.3.9　不同诱导时间对重组5′-nucleotidase诱导表达的影响

3.3.10　重组5′-nucleotidase的核酸酶活性检测

3.3.11　不同浓度的重组蛋白对其核酸酶活性的影响

3.3.12　温度对重组5′-nucleotidase核酸酶活性的影响

3.3.13　重组5′-nucleotidase热稳定性检测

3.3.14　pH对重组5′-nucleotidase核酸酶活性的影响

3.3.15　离子对重组5′-nucleotidase核酸酶活性的影响

3.4　讨论

3.5　小结

第4章　鼠伤寒沙门菌5′-nucleotidase基因缺失菌株的构建与生物学特性

4.1　材料

4.1.1　菌株、质粒和细胞

4.1.2　主要试剂和培养基

4.1.3　主要试剂的配制

4.1.4　主要仪器设备

4.2　方法

4.2.1　引物的设计合成

4.2.2　5′-nucleotidase基因上下臂片段的扩增

4.2.3　中间载体pSK-Δ5′-nucleotidase的构建

4.2.4　重组自杀性质粒pRE-Δ5′-nucleotidase的构建

4.2.5　缺失菌株SL1344Δ5′-nucleotidase的筛选

4.2.6　沙门菌感受态的制备

4.2.7　沙门菌的电转化

4.2.8　SL1344CΔ5′-nucleotidase回复菌株的构建

4.2.9　缺失菌株SL1344Δ5′-nucleotidase的表型鉴定及生化特性

4.2.10　缺失菌株SL1344Δ5′-nucleotidase的遗传稳定性

4.2.11　缺失菌株SL1344Δ5′-nucleotidase生长特性

4.2.12　5′NT基因对鼠伤寒沙门菌运动性的影响

4.2.13　缺失菌株SL1344Δ5′-nucleotidase的耐酸碱和耐盐性检测

4.2.14　5′NT基因对鼠伤寒沙门菌耐药性的影响

4.2.15　缺失菌株SL1344Δ5′-nucleotidase的生物被膜检测

4.2.16　缺失菌株SL1344Δ5′-nucleotidase对HeLa细胞的黏附和侵入试验

4.2.17　缺失菌株S L1344Δ5′-nucleotidase的毒力测定

4.2.18　缺失菌株免疫小鼠后血清中IgG含量的测定

4.2.19　缺失菌株SL1344Δ5′-nucleotidase免疫保护率测定

4.2.20　缺失菌株的胞外蛋白核酸酶活性检测

4.3　结果

4.3.1　5′-nucleotidase基因上下臂片段的扩增

4.3.2　中间载体pSK-Δ5′-nucleotidase的鉴定

4.3.3　自杀性质粒pRE-Δ5′-nucleotidase的鉴定

4.3.4　缺失菌株SL1344Δ5′-nucleotidase的筛选

4.3.5　SL1344CΔ5′-nucleotidase回复菌株的鉴定

4.3.6　缺失菌株SL1344Δ5′-nucleotidase的表型鉴定及生化特性

4.3.7　缺失菌株SL1344Δ5′-nucleotidase的遗传稳定性

4.3.8　缺失菌株SL1344Δ5′-nucleotidase生长特性鉴定

4.3.9　5′NT基因对鼠伤寒沙门菌运动性的影响

4.3.10　缺失菌株的耐酸碱性和耐盐性检测

4.3.11　5′NT基因对鼠伤寒沙门菌耐药性的影响

4.3.12　缺失菌株SL1344Δ5′-nucleotidase的生物被膜检测

4.3.13　缺失菌株对HeLa细胞的黏附和侵入试验

4.3.14　SL1344Δ5′-nucleotidase缺失菌株毒力测定

4.3.15　缺失菌株免疫小鼠后血清中IgG含量的测定

4.3.16　缺失菌株SL1344Δ5′-nucleotidase免疫保护率测定

4.3.17　缺失菌株的胞外蛋白核酸酶活性检测

4.4　讨论

4.5　小结

第5章　重组5′-nucleotidase核酸酶活性对METs的作用

5.1　材料

5.1.1　主要试剂

5.1.2　主要仪器设备

5.1.3　主要培养基及配制

5.2　方法

5.2.1　缺失菌株荧光显微镜观察METs的形成

5.2.2　5′NT基因对METs杀伤鼠伤寒沙门菌的影响

5.2.3　不同浓度r5′NT对巨噬细胞活力影响

5.2.4　不同孵育时间下r5′NT对巨噬细胞活力影响

5.2.5　荧光显微镜观察r5′NT对METs的作用

5.2.6　重组蛋白r5′NT对METs杀伤鼠伤寒沙门菌缺失株的影响

5.3　结果

5.3.1　荧光显微镜观察5′NT基因对鼠伤寒沙门菌诱导METs形成的影响

5.3.2　5′NT基因对METs杀伤鼠伤寒沙门菌的影响

5.3.3　不同浓度重组蛋白r5′NT对巨噬细胞活力影响

5.3.4　不同处理时间下重组蛋白r5′NT对巨噬细胞活力影响

5.3.5　荧光显微镜观察重组蛋白r5′NT对METs的作用

5.3.6　重组蛋白r5′NT对METs杀伤鼠伤寒沙门菌缺失株的影响

5.4　讨论

5.5　小结

第6章　结论

附录　中英文符号对照表

参考文献